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项目介绍流式细胞术是一种基于荧光的检测，从悬浮于溶液中的单个细胞就能同时测定多种特性，例如细胞群计数和蛋白丰度。它是一种强大的工具，可实现细胞特性的快速、定量和准确测定，并且提供针对细胞群异质性的卓越解读。
这是使用引导单个细胞流通过光源并测定各种波长中所产生的光能散射和发射的仪器实现的。研究人员使用具有不同激发和发射特性的荧光分子，以便能够合并、检测和区分它们，从而在单个细胞中获得多个读数。这些荧光分子可以附接到靶向特定蛋白或蛋白修饰的抗体上，或者它们可作为染料直接结合细胞组分。
样品要求
1.块体类—薄膜、布料、金属块、纸片、凝胶等
送样量：该类样本处理方式建议为先铺细胞，再放材料（适用于材料轻薄）；或者浸提处理，可参考国标ISO 10993-12 2007中的浸提方式浸提，根据浸提方式按量和检测时间点提供；
制样要求：若是需要把细胞接种到材料上的话，金属块、凝胶类样本须制备成统一大小的圆形/方形，建议制备直径为30-33 mm圆形。布料、纸片类样本可代为裁剪，默认制备直径为32 mm。
2.液体类
送样量：根据测试时样本浓度和检测时间点而定，按照单次检测需要的3-5倍的量寄送；若采用稀释后样本测试，则须告知稀释倍数及工作液浓度；若溶剂为有机溶剂（如DMSO，醇类，酚类等），最高工作液浓度中，溶剂的占比低于0.5%。
3.粉末类
送样量：根据测试时样本浓度和检测时间点而定，按照单次检测需要的3-5倍的量寄送；
①可溶性粉末：注明溶剂的种类（如无水乙醇，异丙醇，DMSO，培养基，PBS或者生盐水等），当样品对溶剂有特殊需求时，请在送样时附加所需溶剂；
②不可溶粉末：注明样本性质，灭菌方式，及分散为均匀悬浮液所需必要步骤，
如果不可使用分散液，需要预试，样本量可联系本公司人员确认。
【不需要与细胞孵育培养】
1、直接流式检测样本，寄送时避光4度低温保存，包装完整，标明分组情况和测试条件；
2、需要试剂盒染色处理样本，寄送时4度低温保存，包装完整，标明染色试剂盒和测试条件，若需要特殊染色试剂盒，请自行提供或本公司代为购买。
注：测试时，默认每组1个平行，流式上机检测3次。
结果展示八色小鼠脾脏免疫表型分析
常见问题-
流式同型对照怎样选择？
同型对照（Isotype Control）：使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色。如果一抗是多抗，可以用an normal serum（与一抗相同的正常血清） （must be the same species as primary antibody）。This control is easy to achieve and can be used routinely in immunohistochemical staining.这个可以咨询试剂商。同型对照为免疫荧光标记中的阴性对照。由于荧光标记单抗的组来源不同，应选用相同来源的未标记单抗作为同型对照来调整背景染色。举个例子：比如检测一抗为单抗的mouse anti rat CD11b，clone OX-42 purified IgG，那么它的isotype 是mouse IgG2a， 所以可以用purified（纯化的） mouse IgG2a来做OX-42的同型对照（Isotype Control）。一般的的生物技术公司和国内的代理都有出售。 同型对照：是指与MoAb相同的、未免疫小鼠的免疫球蛋白亚类，若使用直接免疫荧光染色法，同型对照也应标记荧光色素，如IgG1 FITC、IgG2ａ、PE等。主要考虑了细胞的自发荧光、FC受体介导的抗体结合和非特异性抗体结合等影响因素。此外，同型对照与MoAb所标记的荧光色素、浓度、F：P比值（标记的荧光色素与免疫球蛋白分子的比值）应该相同为zuijia，这对准确设定阴性与阳性细胞的界标有重要意义，切忌使用与MoAb不相匹配的同型对照，zui好为同一实验室、采用相同工艺或方法制备（如同一品牌）的产品。
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怎样用流式细胞仪来鉴定小鼠BMDC？
检测小鼠BMDC主要是从形态学和细胞表面分子两方面来鉴定我做的时候就做了普通光镜下形态、电镜（扫描和透射），另外检测了小鼠BMDC表面的共刺激分子如CD86 、CD11、CD80。还做了MHC II类分子的检测，还有MHCI类分子的检测，这些分子在DC表面都不是特异存在的，在巨噬细胞、淋巴细胞表面也有表达，所以目前并没有非常特异性的方法检测你的细胞一定就是DC，但是从形态和表面分子的检测结合来看，效果就比较好了.一般在幼稚的DC上述分子表达水平较低，DC成熟过程中，上述分子表达呈上调趋势，你可以在不同的培养时间分别检测。
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为什么要进行荧光补偿？
流式细胞分析中经常要用到2种以上的荧光标记抗体进行染色，而目前所使用的多种荧光染料发射谱间有一定重叠。“荧光补偿”这个术语是指修正荧光渗漏的过程，如从探测器除去匹配荧光以外的任何荧光信号。
