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项目介绍细胞毒性是指某种物质对细胞造成损伤的程度；可造成细胞损伤或死亡的物质或过程即为“有细胞毒性的”。接触细胞毒性化合物的细胞可能发生坏死（不受控制的细胞死亡）、凋亡（程序性细胞死亡）、自噬、或停止活跃生长和分裂，导致细胞增殖能力降低。
细胞毒性检测实验可用于衡量细胞毒性化合物引起细胞损伤或细胞死亡的能力。细胞毒性检测分析在基础研究和药物研发的有毒化合物筛选中有着广泛的应用。在药物研发中，细胞毒性是评估化合物用途和药效的关键因素。有细胞毒性的化合物可能会在后续筛选中淘汰掉；靶向快速分裂细胞的化合物可能会成为癌症治疗的候选化合物。
MTT检测法
MTT是一种黄色染料，已经普遍用于细胞增殖与毒性检测。检测的原理在于：MTT是一种可接受氢离子的化合物染料，带正电荷，具有细胞膜渗透性。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将外源进入的MTT还原成为水不溶性的深蓝色MTT-甲臜结晶，而死细胞不具有此功能。
CCK-8检测法
CCK-8检测应该是目前应用得比较广泛得一种细胞毒性与增殖检测方法。CCK-8是Cell Counting Kit-8的简称，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8属于MTT的升级产品，工作原理为：在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450nm波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。
样品要求
1. 块体类—薄膜、布料、金属块、纸片、凝胶等
（1）送样量：a. 与细胞的作用方式为直接接触的话，至少3个/种细胞/时间点；b.样本处理方式为浸提的话，可参考国标ISO 10993-12 2007中的浸提方式浸提，根据浸提方式按量和检测时间点提供；
（2）制样要求：若是需要把细胞接种到材料上的话，金属块、凝胶类样本须制备成统一大小的圆形/方形，建议制备直径为5-7 mm圆形。布料、纸片类样本可代为裁剪，默认制备直径为6 mm。
2. 液体类
送样量：根据测试时样本浓度和检测时间点而定，按照单次检测需要的3-5倍的量寄送；若采用稀释后样本测试，则须告知稀释倍数及工作液浓度；若溶剂为有机溶剂（如DMSO，醇类，酚类等），最高工作液浓度中，溶剂的占比低于0.5%。
3. 粉末类
送样量：根据测试时样本浓度和检测时间点而定，按照单次检测需要的3-5倍的量寄送；其中：
a. 可溶性粉末：注明溶剂的种类（如无水乙醇，异丙醇，DMSO，培养基，PBS或者生盐水等），当样品对溶剂有特殊需求时，请在送样时附加所需溶剂；
b. 不可溶粉末：注明样本性质，灭菌方式，及分散为均匀悬浮液所需必要步骤，
<如果不可使用分散液，需要预试，样本量可联系本公司人员确认>
注：测试时，默认每组3个平行，每孔培养基加样量100μL。
结果展示
不同人参皂苷Rg2浓度下细胞的生存率（OD值体现）
Na2MoO4诱导卵巢癌细胞铁死亡（Na2MoO4 induces ferroptosis of ovarian cancer cells.）
常见问题-
MTT法检测细胞活性的原理？
哺乳动物胞的线粒体酶可将黄绿色的MTT降解形成蓝紫色的物质，用二甲基亚砜（DMSO）将其溶解成溶液，用酶标仪测定其浓度（570nm），从而定量测定细胞的存活比例。
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CCK8法检测细胞活性的原理？
CCK-8（cell-counting kit-8）检测试剂盒是应用WST-8取代MTT被还原，WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。应用酶标仪测定吸光值（450nm）并进行统计学计算便可以获得细胞毒性相关数据。
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灭菌方法怎么选择？
目前可以开展高温高压蒸汽灭菌、紫外照射灭菌和过滤除菌等。高温高压蒸汽灭菌（121℃、20min），最彻底的灭菌方法，推荐用此方法灭菌；或者酒精浸泡（30min），但样品不能溶于酒精；另外紫外照射灭菌（30min），不太彻底，如需延长照射让灭菌更彻底需要提前告知；如果是液体样品也可以采用过滤除菌（0.22μm的过滤器），可以除去大部分微生物。
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在细胞毒性分析中，细胞毒性检测试剂如何识别细胞开始死亡?
在细胞毒性分析中，预测细胞死亡的最常用方法是使用无法渗透完整脂质双分子层的试剂。在细胞死亡级联反应开始时，脂质双分子层会出现多孔和渗漏，使试剂进入细胞并将细胞核染色。其他分析能够检测细胞死亡的不同阶段和形式。细胞凋亡分析可检测某些濒死细胞标志物，如激活的 Caspase 和 Annexin V。
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细胞毒性分析与细胞迁移或细胞增殖分析能否实现多重分析吗?
这3种分析并不相互排斥。细胞毒性分析可轻松地与细胞增殖或细胞迁移分析共同进行。唯一需要考虑的因素是需要有足够的成像通道来同时监测所有分析的读数。使用 |ncucyte”活细胞成像系统可追踪细胞汇合度(不需要荧光染料)、趋化性(红色或绿色通道)和细胞毒性(剩余通道)。
