HPLC 是高效液相色谱法的缩写。“色谱法”是一种分离技术，“色谱图”是色谱法的结果，“色谱仪”是进行色谱法的仪器。

在色谱分析技术的发展中，用于分子分离的专用装置（色谱柱）和以稳定流速输送溶剂的高性能泵是色谱分析仪器的关键部件。随着相关技术的日益成熟，通常称为高效液相色谱分析的系统被简称为“LC”。如今，能够进行高速分析的超高效液相色谱分析（UHPLC）也越来越普及。

只有溶解在溶剂中的化合物才能用 HPLC 进行分析。HPLC 分离溶解在液体样品中的化合物，并可以定性和定量分析样品中含有哪些成分以及每种成分的含量。

图 1 显示了 HPLC 过程的基本概述。用于分离液体样品中成分以进行 HPLC 分析的溶剂称为流动相。流动相被输送到分离柱（也称为固定相），然后以由溶剂输送泵控制的稳定流速输送到检测器。将一定量的样品注入柱中，分离样品中所含的化合物。分离在柱中的化合物由柱下游的检测器检测，并识别和量化每种化合物。

2 色谱装置

至此，我们已经介绍了“HPLC 流程的基本概述”（如图 1 所示）及其机制。更详细地说，HPLC 由多种组件组成，包括溶剂输送泵、脱气装置、进样器、柱温箱、检测器和数据处理器。图 2 显示了 HPLC 流程图和每个组件的作用。

图2 HPLC 流程图

对于 HPLC，泵以受控流速输送流动相 (a)。在我们生活的标准大气压下，空气很容易溶解在流动相中。如果流动相中含有气泡并进入输送泵，可能会出现流速波动和基线噪声/漂移等问题。脱气装置通过去除流动相中的气泡来帮助防止此问题 (b)。溶解的空气被去除后，流动相被输送到色谱柱中。然后，样品注射器将标准溶液或样品溶液引入流动相 (c)。温度波动会影响色谱柱中化合物的分离。色谱柱放在色谱柱炉中以保持温度恒定 (d)。从色谱柱中洗脱的化合物由位于色谱柱下游的检测器检测 (e)。工作站处理来自检测器的信号以获得色谱图以识别和量化化合物 (f)。

3 HPLC 分离

HPLC是利用各化合物通过色谱柱的速度差异，对各化合物进行分离检测的。图3为HPLC分离的一个例子。

HPLC 有两个相：流动相和固定相。流动相是溶解目标化合物的液体。固定相是色谱柱中与目标化合物相互作用的部分。

在色谱柱中，组分与流动相的亲和力（例如范德华力）越强，组分随流动相通过色谱柱的速度就越快。另一方面，与固定相的亲和力越强，组分通过色谱柱的速度就越慢。图 3 显示了一个例子，其中黄色组分与流动相的亲和力强，在色谱柱中移动得很快，而粉色组分与固定相的亲和力强，在色谱柱中移动得很慢。色谱柱中的洗脱速度取决于化合物与固定相之间的亲和力。 

图3 HPLC 分离示例

4 如何读色谱图

“色谱图”一词是指通过色谱法获得的图。图 4 显示了色谱图的示例。色谱图是一个二维图，纵轴表示检测器信号强度的浓度，横轴表示分析时间。当没有化合物从色谱柱中洗脱时，绘制一条与横轴平行的线。这被称为基线。检测器根据洗脱带中目标化合物的浓度做出响应。获得的图更像是钟形而不是三角形。这种形状称为“峰”。 

保留时间（tR）是样品注入点与峰顶点之间的时间间隔。非保留化合物（与固定相无相互作用的化合物）从注入器到检测器所需的时间称为死时间（t0）。

峰高（h）为峰顶与基线的垂直距离，淡蓝色表示的峰面积（A）为峰与基线所围成的面积。这些结果可用于样品成分的定性和定量分析。