WB（Western Blot，蛋白质印迹法）实验是基于抗原-抗体特异性结合的特性来检测特定蛋白质的一种蛋白质检测技术。基本原理是经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品，转移到固相载体例如硝酸纤维素薄膜（NC膜）或PVDF膜上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。

样品要求

预约前需要您确认的信息：

（1）明确样品中是否存在检测的目的蛋白？并且在哪个时期存在？是否需要外源性刺激其表达？（这些问题决定了前处理的方法和时间）

（2）目的蛋白的是否容易出现降解？分子量大小？是否存在于细胞或组织特定部位需要特殊方法提取？（这些问题涉及目的蛋白提取方案及是否可以寄送）

（3）目的蛋白含量是否达到wb的检测限？（目前认为Western Blot的有效检测下限为0.1-1ng，含量高有助于条带显影)。

一、需要提供

1. 待测样品（材料或者样品处理后的细胞/蛋白，也可由我们代处理）；

2. 提供待测样品的一抗及其说明书（一抗一般为10ul左右，也可由平台代购）；

3. 其他所涉及的细胞、试剂盒以及生物耗材等平台都可以有偿提供。

二、送样须知

1.  细胞样品：细胞量1-2*10⁷个，需要用PBS 清洗后，离心收集细胞沉淀，不能残留PBS，封口膜封口，标记，放入-80°C 冰箱保存，干冰运输寄送。

2. 组织样品：200mg以上组织，取样品后尽量快速操作，放入液氮中速冻或者立刻存入-80°C 冰箱，样品不能反复冻融，干冰运输寄送。

3. 蛋白样品：未变性的蛋白需要存入-80°C ，干冰运输寄送；Loading Buffer煮沸的蛋白，需要提供蛋白浓度(浓度需在5μg/μl 以上，200μl样品)，冰袋运输寄送。

4.  植物组织样品：选取新鲜组织，200mg以上组织，尽量避免衰老，病变，发霉的组织；将样品剪成小块放入液氮预冷的螺口离心管中，在液氮中速冻5min，-80度保存，干冰运输寄送。

5. 血液样品： 样品无潜在性携带病原体和病毒。如果存在病毒的可能性，请灭活处理；

（1）全血：采集新鲜血液，建议全血样品用全血样品RNA提取试剂盒抽提RNA，或者新鲜血液分离白细胞；处理后的样本放入干冰或者﹣80℃冰箱保存，干冰运输寄送。

（2）血浆：用EDTA等抗凝剂处理后的样本，4℃ 4000rpm离心5分钟，上层为血浆样本，按每200µl血浆样本加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol，涡旋摇匀，放入干冰或者-80℃冰箱保存，干冰运输寄送。

（3）血清：用非抗凝管收集血样，静置分离上层血清，按每200uL血清加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol，涡旋摇匀，放入干冰或者-80℃冰箱保存，干冰运输寄送。

6. 菌体：收集菌体到1.5ml的离心管内，离心去上清，用1*pbs洗涤三次，液氮速冻5min后，-80度保存。